
保存条件:避光、-20°C储存,避免反复冻融
英文名称:Streptavidin, AF594 conjugate
中文名称:AF594标记链霉亲和素;AF594-链霉亲和素 conjugate
激发:590 nm
发射:617 nm
规格:5mg,10mg,25mg
纯度:95%+
二、基本特性和结构功能特异性/敏感性
展开剩余80%Streptavidin has a remarkably high affinity for its natural ligand, biotin. The complex and irregular structure of the biotin-binding site makes it highly optimized for biotin binding and confers great specificity to the streptavidin-biotin complexes.
链霉亲和素对其天然配体生物素具有非常高的亲和力。生物素结合位点的复杂和不规则结构使其针对生物素结合进行了高度优化,并赋予链霉亲和素-生物素复合物极大的特异性。
功能结构与组成
核心蛋白:链霉亲和素(Streptavidin)
链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的四聚体蛋白,由四个相同的亚基组成,每个亚基含159个氨基酸,分子量约54-60 kDa 。
每个亚基具有一个 生物素结合位点,因此整个四聚体可同时结合四个生物素分子,形成高度稳定的复合物。
结构上,每个单体由八条反向β折叠链形成桶状结构,关键残基(如Trp120)参与生物素的特异性结合。
荧光标记:AF594染料
AF594(Alexa Fluor 594)是一种红橙色荧光染料,化学结构包含磺酸基、羧基等亲水基团,使其水溶性良好。
激发波长(Ex)为 590 nm,发射波长(Em)为 617 nm,光谱特性与TRITC或Texas Red通道兼容。
通过共价偶联(如NHS酯反应)将AF594连接到链霉亲和素的赖氨酸残基上,形成稳定的偶联物。
三、质量控制与注意事项(一)性能验证
浓度测定:紫外分光光度法(A280),消光系数参考厂商数据。
生物素结合活性:通过HABA染料法或生物素滴定法验证。
(二)常见问题处理
高背景:
增加洗涤次数(含0.1–0.2% Tween-20的缓冲液)。
优化封闭条件(如5% BSA封闭1小时)。
沉淀形成:
过滤工作液(0.2 μm滤膜)。
避免冷冻保存的反复冻融。
(三)兼容性限制
避免干扰物:
螯合剂(如EDTA)抑制酶偶联物活性。
强酸性环境(pH < 5.0)使荧光失活。
空间位阻:大分子偶联物(如酶标Streptavidin)可能无法穿透细胞膜,不适用于胞内抗原检测。
四、关联试剂CF 568 WGA
CF 594 WGA
CF 633 WGA
CF 640R WGA
Sulfo-Cyanine7-N3
Val-Ala-PAB-MMAE
Fmoc-Val-Ala-PAB-OH
Biotin-PSMA;生物素-PSMA
ATTO 633 NHS ester;AT 633 NHS
iFluor 647 酪胺(iFluor 647 Styramide)
羟甲基硅罗丹明-氨基甲酸酯-苄基鸟嘌呤
Tamra TSA;羧基四甲基罗丹明 - 酪胺
Qdot 655 WGA;Qdot 655小麦胚芽凝集素
(本文内容由陕西新研博美生物科技有限公司木南整理)
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